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細胞培養中無菌操作技術點擊次數：2799 更新時間：2011-09-14
細胞培養中無菌操作技術
細胞培養中的無菌技術：www.dghuayuan.cn
1. 實驗進行前，無菌室及無菌操作臺（laminar flow） 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10 分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后，再進行下一個細胞株的操作。
2. 無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其它實驗用品用完即應移出，以利于氣流之流通。實驗用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在臺面的中央無菌區域，勿在邊緣的非無菌區域操作。
3. 小心取用無菌的實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口，亦不要在打開的容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4. 工作人員應注意自身的安全，須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染的細胞株應特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺（至少Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol 的產生，小心毒性藥品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖銳針頭的傷害等。
5. 定期檢測下列項目：
5.1. CO2 鋼瓶的CO2 壓力
5.2. CO2 培養箱的CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染（水盤的水用無菌水，每周更換）。
5.3. 無菌操作臺內的airflow 壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000 小時/HEPA）。
6. 水槽可添加消毒劑（Zephrin 1:750），定期更換水槽的水。
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